1、優(yōu)質(zhì)的儀器用水

優(yōu)質(zhì)的儀器用水是使用好檢驗試劑的一個十分重要環(huán)節(jié)之一。因為測定離子類的項目：比如銅、鐵、鋅、鈣、鎂、磷。

這些項目在使用過程中，儀器用水的質(zhì)量相當(dāng)重要，雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都帶有制水系統(tǒng)，但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水，離子交換樹脂在使用一段時間后交換能力明顯下降，需要定期進(jìn)行更換，否則制備的水離子含量多，電導(dǎo)率偏高。使用含離子超標(biāo)的水沖洗儀器，直接影響檢驗結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項目，如果水質(zhì)不好，儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，則檢測該項目的結(jié)果也會受到嚴(yán)重的影響。還有如果血清中含有GLDH，而儀器用水存在氨時，可消耗NADH，使利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)監(jiān)測法結(jié)果偏高。解決辦法：定期監(jiān)測水質(zhì)，當(dāng)儀器用水的電阻小于1．0MQ時要更換離子交換樹脂或活性炭。

2、標(biāo)本的及時分離及測定

標(biāo)本的及時分離及測定是用好檢驗試劑的首要環(huán)節(jié)因為凡是利用NADH轉(zhuǎn)化為NAD 變化率來檢測其物質(zhì)含量的試驗都或多或少受到血液存放時間的影響。原因是全血存放時間越長，紅細(xì)胞利用血清中的糖進(jìn)行無氧酵解產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸使NADH轉(zhuǎn)化為NAD ，這樣使測定結(jié)果假性升高。解決辦法：作好與臨床的溝通，對抽血人員和標(biāo)本運送人員(傳遞人員)進(jìn)行培訓(xùn)； 及時分離血清并及時檢測； 也可將全自動生化分析儀上的延遲時間設(shè)置大于60秒，這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮酸的干擾，可完全避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。

3、交叉污染

3．1 生化分析儀本身的清洗問題造成的交叉污染在使用

全自動生化分析儀時，儀器的交叉污染現(xiàn)象是引起實驗結(jié)果偏離的一個原因。由于全自動生化分析儀試劑針需要接觸各種試劑，一般難以徹底清洗干凈，所以容易造成分析項目的攜帶污染．而生化項目的測定往往僅需要幾微升樣本，試劑往往需要幾百微升，尤其在沒有自動沖洗程序的流動池式生化分析儀上，由于前帶現(xiàn)象的存在，如果前一個樣本為高值樣本，則接后的第一個低值標(biāo)本結(jié)果應(yīng)慎重報告。不僅沒有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現(xiàn)象，就是具有自動沖洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染，例如Beckman全自動生化分析儀CX4，它的試劑吸針(Probe)、樣品吸針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗液沖洗，然后用高壓壓縮空氣吹干，有時由于洗液壓力和壓縮空氣的壓力偏低，使試劑吸針、樣品吸針及反應(yīng)混勻棒沖不干凈、吹不干，從而導(dǎo)致反應(yīng)池之問相互污染、試劑問交又污染，使檢驗結(jié)果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用，使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的“特氟龍”吸頭不及時更換，使吸樣針或試劑針密封層增大，產(chǎn)生泄漏現(xiàn)象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個重要原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準(zhǔn)確，通常導(dǎo)致利用速率法測試的標(biāo)本系統(tǒng)偏低或偏高。眾所周知，速率法計算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的，如果加樣體積或加試劑體積不準(zhǔn)，導(dǎo)致真正速率計算因子和理論計算因子偏離，從而使檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。解決辦法：定期進(jìn)行儀器維護(hù)保養(yǎng)；按要求及時更換零部件；定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)；全自動生化分析標(biāo)本和試劑用量少，殘存少量即會影響測試結(jié)果，每天應(yīng)用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染。

3．2 檢驗項目間的交叉污染

在全自動生化分析儀的使用中，我們發(fā)現(xiàn)一個項目會影響緊隨其后項目的測試結(jié)果，造成這種影響的原因之一是一種試劑中含有另一試驗的測定物質(zhì)而直接干擾其測試結(jié)果。原因之二是一種試劑中含有改變另一試驗反應(yīng)條件或影響其反應(yīng)進(jìn)程的物質(zhì)而間接干擾其測試結(jié)果。比如：在TP試劑中含有大量的CuSO4，如果將Cu放在TP項目的后面檢測，會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。再如P放在含有磷酸鹽的項目后面，TBA放在含有膽酸鹽的項目后面都會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。GLU放在CK和CK-MB的項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。LDH放在ALT和AST的項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Ca放在Amy項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg試劑(CALMAGITE法)中含有EGTA，會干擾Ca的測定結(jié)果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個項目的PH值相差太大或反應(yīng)對PH要求嚴(yán)格的項目，也會對測定的結(jié)果產(chǎn)生影響，比如TP和Alb之間PH相差較大，會互相干擾，TBA放在Alb后面測定，會使測定結(jié)果偏低等等。解決辦法：調(diào)整實驗的前后順序來消除這種影響；在造成污染的項目和受污染的項目之間設(shè)置清洗劑并設(shè)定進(jìn)行清洗的次數(shù)。

4、正確的參數(shù)設(shè)置也是用好檢驗試劑的一個關(guān)鍵因素

現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定，包括樣品量、試劑量、波長、分析方式和延遲時間、測試時間的設(shè)定等。下面我們就延遲時間和加樣程序的設(shè)定來說明正確使用分析參數(shù)對于正確運用試劑的作用。比如肌酐苦味酸測定法，我們在設(shè)定延遲時間時應(yīng)注意到苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物，而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽性干擾，解決辦法：最好設(shè)定延遲時間為50～60秒之間，測定時間小于60秒，這樣就充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾，從而檢測到真正肌酐含量。

5、校準(zhǔn)液的正確使用

由于目前生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液并非通用的，只適用于某一特定的分析系統(tǒng)。同一項目不同方法學(xué)之間有很大差異，同一項目不同方法學(xué)的校準(zhǔn)液更不能混用，但是在臨床檢驗中經(jīng)常會發(fā)生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準(zhǔn)液校準(zhǔn)，乳酸脫氫酶L—P法用P—L法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)。TBA循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)等都會造成測定結(jié)果不準(zhǔn)確。另外同一方法學(xué)，不同廠家的校準(zhǔn)品和試劑都會有所差異。解決辦法：建議結(jié)合各實驗室條件選擇適合自已實驗室的校準(zhǔn)品，如有條件可進(jìn)行系統(tǒng)溯源；建立滿足在同一方法學(xué)、同一測定條件、與理論計算的factor值差異不大，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進(jìn)行校正測定；建立一個可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ)，然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到“使用方法”測定中去，使“使用方法”測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來。在實現(xiàn)溯源性目標(biāo)過程中，永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實驗對象，以方法學(xué)對比試驗方法為驗證手段。采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計分析，斜率接近1，截距較小，說明“使用方法”對標(biāo)本測定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對標(biāo)本檢測結(jié)果非常接近，檢測結(jié)果可靠。

6、抗凝劑的使用

目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA-K2、肝素、草氨酸鈉等，TBA和AFU不能用肝素抗凝劑，因為肝素會使TBA和AFU試劑發(fā)生混濁，導(dǎo)致吸光度假性偏高，從而使檢測結(jié)果偏高。解決辦法：認(rèn)真參閱試劑說明書；作好與抽血人員之間的溝通和培訓(xùn)，使抽血人員知道什么項目用何種標(biāo)本。

7、混成單一試劑的問題

比如酶法肌酐試劑，第一步R1中的酶要消除樣品中內(nèi)源性肌酸的干擾，如果混成單一試劑，則會使檢測結(jié)果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成單一試劑，因為它們都要分別清除HDL和LDL以外的脂蛋白，從而達(dá)到檢測的目的，如果混成單一試劑，則會使測定的HDL和LDL不準(zhǔn)確。另外，有的試劑混成單一試劑后，穩(wěn)定性和抗干擾能力也會明顯下降。解決辦法：在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑；如一定要使用單一試劑，最好選擇試劑廠家針對部份項目專門生產(chǎn)好的單一試劑。

8、試劑開瓶的問題

隨著全自動生化分析儀的普及，“開瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視，但是就目前有的試劑方法學(xué)來講，還達(dá)不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內(nèi)放很長時間不需要定標(biāo)，比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑，開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長時間開瓶不定標(biāo)或校準(zhǔn)，會使檢測結(jié)果發(fā)生偏離，在國外有的項目有明文規(guī)定，必須72小時之內(nèi)定標(biāo)，比如BUN。但是在國內(nèi)的某些實驗室為了方便，很長時間都不作校準(zhǔn)，導(dǎo)致測定結(jié)果的不準(zhǔn)確。解決辦法：了解試劑的特性，及時對部份項目進(jìn)行校準(zhǔn)，對于每天標(biāo)本量不多的醫(yī)院，可按1～2天的用量取用試劑放入儀器。

9、不同批號試劑相混的問題

目前將不同批號的試劑混合在一起使用的現(xiàn)象在檢驗中經(jīng)常發(fā)生，當(dāng)然這一方面是為了節(jié)省成本，另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、什么試劑，由于不同批號的試劑生產(chǎn)時間不同，試劑中工具酶的活性會有差異，會發(fā)生水解的底物濃度隨時間長短也會不同。因此混在一起使用而又不定標(biāo)，可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。還有如果有的試劑開瓶時間太長，空氣中的灰塵或細(xì)菌會進(jìn)入瓶中，由于有的試劑含有大量的蛋白質(zhì)和鹽，是細(xì)菌生長的最好條件，雖然有的試劑添加了防腐劑，但防腐劑的防腐也是有一定限度的，而且絕大多數(shù)廠家的試劑中是沒有加防霉劑的。解決辦法： 不同批號試劑建議不要混用，如果混用最好重新定標(biāo)；試劑瓶在儀器內(nèi)使用時間不要過長，及時更換。一般每個試劑瓶內(nèi)由于試劑針不能吸完，或多或少都會留有幾毫升的試劑，如果是同一批號可以將未開瓶的同一批號試劑往里倒。但如果不是同一批號的試劑時倒人后最好定標(biāo)，最好的做法是將每個批號的剩余試劑留起來待一定數(shù)量后混在一起，然后重新定標(biāo)后檢測。